色譜柱的清洗和再生的幾個方法

通常情況下，

對于常用的反相色譜柱出現(xiàn)了嚴重的柱效降低需要考慮再生時，建議大家用以下流程來進行沖洗：

一、沖洗流程

1. 20倍柱體積水：乙腈= 95%：5% （用于移除系統(tǒng)中緩沖鹽，可根據(jù)常用緩沖鹽濃度調(diào)整比例）
2. 20倍柱體積 乙腈
3. 5倍柱體積 異丙醇
4. 20倍柱體積 正己烷
5. 20倍柱體積 乙腈。20倍柱體積 水：乙腈=95%：5% （可與步驟1保持相同的比例）
6. 用所需的流動相比例重新平衡色譜柱

實際上在色譜柱沖洗時，

很多實驗室習(xí)慣用沖洗時間來評價是不是達到我們想要的效果。

例如某位師傅告訴你把這個柱子沖半個小時就可以了。 

然而色譜柱的沖洗應(yīng)該使用沖洗的溶劑體積來評價沖洗效果。

例如這次提到的20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱是指什么呢？

其實柱體積需要按照你使用的色譜柱的內(nèi)徑和柱長來計算。

 

通過公式就很容易算出柱體積了，

例如一根4.6mm內(nèi)徑，150 mm柱長的色譜柱柱體積為：

如果要用20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱就需要約34mL的乙腈，假設(shè)你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈沖洗34分鐘。

當柱流量是1.5 mL/min時就需要用乙腈沖洗約23分鐘。

沖洗色譜柱時，色譜柱的尾端不要接檢測器，接一個可以收納廢液的容器就行了。

為了應(yīng)對不同類型的分析項目，實驗室里常常會配置三種柱子：

一根弱極性柱，一根中等極性柱，和一根強極性柱。