ACE 和菲羅門 C4反相色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的反相色譜柱。
使用3微米粒徑的硅膠填料，優(yōu)化了孔徑，固定相配體的烷基鏈長及表面鍵合密度，可實(shí)現(xiàn)高分辨率和高回收率的分析。
使用短柱可以在高流速下實(shí)現(xiàn)快速分析。
ACE 和菲羅門 C4反相色譜柱的優(yōu)點(diǎn)介紹：
1、定量結(jié)果更準(zhǔn)確，包括純度分析和穩(wěn)定性分析
2、靈敏度更高，檢測下限更低，對低濃度雜質(zhì)有更強(qiáng)的檢測能力
3、分離度更好，更有利于相鄰色譜峰的分離
4、色譜柱間重現(xiàn)性： 指同一批次合成的填料之間的重現(xiàn)性
5、色譜柱批次間重現(xiàn)性： 指不同批次合成的填料之間的重現(xiàn)性。
C4反相色譜柱在使用前，醉好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時(shí)要按照C4反相色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是醉佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、醉好使用流動相溶解樣品。
b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時(shí)間保留在柱中）。
b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果;降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。
d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，醉好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的C4反相色譜柱，要追求醉佳柱效，醉好使用醉佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的C4反相色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用醉佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。
