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牛奶中氫化可的松檢測的固相萃取方法
（SuperClean Silica）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC 法作為檢測手段。該方法操作方便， 可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用。
二、實驗目標物
氫化可的松(CAS:50-23-7)
三、應用范圍
本方法適用于牛奶中氫化可的松的檢測及確證。
四、實驗材料
NuAnalytical SuperClean Silica 固相萃取柱 500 mg/6 mL。
1、 樣品待測溶液制
稱取牛奶試料 5 g 于 50 mL 離心管中，加 30 mL 乙酸乙酯，均質 1 min，350 r/min 搖床振動 20 min，4200 r/min 離心 10 min，移取乙酸乙酯層。殘渣中加乙酸乙酯 25 mL，均質 1 min， 350 r/min 搖床振動 20 min，4200 r/min 離心 10 min，移取乙酸乙酯層。合并兩次提取液，40 ℃旋轉至近干，加乙酸乙酯 1 mL 和正己烷 5 mL，溶解殘渣，待凈化。
2、活化
用 6 mL 正己烷活化Silica 固相萃取柱。
3、上樣和洗脫
取待測液，通過 Silica 固相萃取小柱富集，棄去流出液。用 6 mL 正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干 5 min，棄去流出液。用 6 mL 正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱，收集洗脫液。
4、重新溶解
洗脫液于 40 ℃氮氣吹干，加 20%乙腈水溶液 2.0 mL 溶解殘余物，過 0.22 μm 濾膜，供HPLC 測定。
5、HPLC 條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
檢測器：UV@254 nm
流動相：A：乙腈 B：0.1%甲酸水溶液
柱溫：室溫
流速：1.0 mL/min
進樣量：20 μL
洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：
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時間/min |
A/% |
B/% |
|
0 |
20 |
80 |
|
15 |
40 |
60 |
|
15.1 |
90 |
10 |
|
19 |
90 |
10 |
|
19.1 |
20 |
80 |
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21.1 |
20 |
80 |
六、實驗結果
1、 牛奶中氫化可的松的 1mg/kg 添加回收結果
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2、添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測色譜圖
圖 1 添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測色譜圖
